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分析糖原合成酶激酶(GSK3β)抗體的性能及樣本處理要求
  • 發布日期:2019-11-14      瀏覽次數:951
    •   糖原合成酶激酶(GSK3β)抗體的實驗原理:
        試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人糖原合成酶激酶3β(GSK3β)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人糖原合成酶激酶3β(GSK3β)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
       
        1、檢測范圍:0.25ng/mL–8ng/mL。
        2、靈敏度:低檢測濃度小于0.1ng/mL。
        3、特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
        4、重復性:板內變異系數小于10%,板間變異系數小于15%。
       
        樣本處理及要求:
        1、血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
        2、血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2-8°C1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
        3、組織勻漿:用預冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
        4、細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
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