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你知道ELISA試劑盒是如何進行計算的嗎?
  • 發布日期:2023-02-26      瀏覽次數:363
    •   ELISA試劑盒用于測定血清、血漿及相關液體樣本中待測物質的含量。
       
        它的實驗原理:
        ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平。用純化的待測物質抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質,再與HRP標記的待測物質抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中待測物質濃度。
       
        ELISA試劑盒的計算:
        以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
       
        它的注意事項:
        1、ELISA試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
        2、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
        3、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
        4、請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
        5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
        6、底物請避光保存。
        7、嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
        8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
        9、本試劑不同批號組分不得混用。
        10、如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
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